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          Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型)
          總貨號: MA0079
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          摩爾濃度計算器
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          產品簡介

          Bradford蛋白濃度測定方法,是常用的經典蛋白濃度檢測方法,在酸性條件下,考馬斯亮藍G250染料能與蛋白質的堿性和芳香族氨基酸迅速結合,可通過檢測溶液595nm處吸光值,計算蛋白質濃度,吸光值與蛋白質濃度在一定范圍內有較好的線性關系。經典Bradford法與BCA法相比,可以兼容更高濃度的還原劑,并且檢測速度極快,但卻無法兼容蛋白提取時常用的去垢劑,而本試劑盒在保留Bradford法原有優點的同時,能夠兼容各種常用去垢劑。

          本試劑盒Bradford檢測試劑溶液呈綠色,在與蛋白質結合后變為藍色,顏色隨蛋白濃度增加而逐漸加深。本試劑盒在測定蛋白質濃度時,可以兼容濃度1% SDS、1% NP-40、1% Triton X-100、1% Brij35和1% Tween 20等多種去垢劑,而且兼容我公司現有的所有蛋白裂解液。本試劑盒經過精心優化,可在上述去垢劑存在條件下,蛋白質樣品或者標準品BSA濃度在0.1-0.5mg/ml范圍內,標準曲線R2值可在0.995以上。


          產品優勢

          兼容性好,可兼容常用去垢劑和蛋白裂解液

          結果穩定,1小時內都可以進行檢測

          快速檢測,5分鐘即可完成蛋白定量時間

          結果準確,線性相關性好,斜率高


          實驗數據

           


          圖1. 上圖是在去垢劑和蛋白裂解液存在時,蛋白標準曲線的實際檢測結果。線性良好標準曲線R2值可在0.995以上。


           


          圖2.上圖是RIPA強蛋白裂解液稀釋蛋白標準溶液時,每隔5min檢測吸光值結果。結果表明本產品在1小時內的吸光值變化很小。


          保存條件

           4℃保存,一年有效。標準蛋白溶液BSA長期不用可放置在-20℃保存。


          注意事項

          1. 當去垢劑濃度大于1%時,部分去垢劑和去垢劑組合仍然適用于Bradford蛋白定量試劑(去垢劑兼容型),但可能會出現斜率降低的現象,影響結果準確度。

          2. 本產品長時間不用會有少量沉淀產生,在使用前請將檢測試劑上下翻轉混勻。

          3. 本產品建議蛋白標準濃度范圍是0.1-0.5mg/ml,如果因實驗需要擴大蛋白標準濃度范圍后出現標準曲線線性不好的現象,可將蛋白標準溶液和蛋白樣品與檢測試劑的體積比例改為5:300。

          4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


          操作步驟

          1. 制備蛋白標準溶液

          將20mg/ml的蛋白標準溶液按照下表進行稀釋,注意在稀釋時盡量保證蛋白標準溶液的稀釋液與待檢測蛋白樣品的溶劑相同,在稀釋時要保證每個濃度的標準蛋白溶液都充分混勻。以下表格內的體積適用于96孔酶標板測定,如使用分光光度計測定,按實際需要擴大溶液體積。

          編號

          稀釋液體(ul)

          蛋白標準溶液體積

          最終濃度(mg/ml)

          A

          97.5

          從蛋白標準溶液BSA取2.5ul

          0.5

          B

          20

          從A管取80ul

          0.4

          C

          20

          從B管取60ul

          0.3

          D

          20

          從C管取40ul

          0.2

          E

          20

          從C管取20ul

          0.15

          F

          20

          從D管取20ul

          0.1

          G

          20

          0

          0


          2. 蛋白標準和蛋白樣品濃度測定

          1) 取10ul上步驟已稀釋好的不同濃度蛋白標準溶液依次加入到96孔酶標板中;

          2) 取10ul待測蛋白樣品加入到96孔酶標板中。注意如蛋白樣品濃度過大,需要用同蛋白標準稀釋液相同的溶液稀釋蛋白樣品。

          3) 每孔加入300ul Bradford蛋白定量試劑(去垢劑兼容型)。用手輕彈酶標板混勻,室溫放置3-5min,注意不可以使用酶標儀震板功能,防止液體灑出污染機器。

          4) 設置酶標儀測定595nm的吸光值,以不含BSA的吸光值做為空白對照。

          5) 以蛋白標準液的濃度為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪制標準曲線,注意將零點去除,得出標準曲線線性公式及R2值。

          6) 按照上述步驟所得公式,根據所測得的蛋白樣品吸光值,計算蛋白樣品的濃度。

          7) 如使用分光光度計測定,可根據實際需要擴大溶液體積,保證蛋白標準溶液和蛋白樣品與Bradford蛋白定量試劑的體積比為10:300,例如,如果需要1.5ml,可取蛋白樣品50ul,Bradford蛋白定量試劑1.5ml。

          我司所售出產品僅供于科研研究用途(非臨床科研研究),每次銷售產品行為都適用于我司網上所列明的通用銷售條款。

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          摩爾濃度計算器 (本計算器可幫助您計算出特定溶液中溶質的質量、溶液濃度和體積之間的關系)
          摩爾濃度計算公式:質量 (g) = 濃度 (mol/L) x 體積 (L) x 分子量 (g/mol)
          質量(g
          =
          濃度 (mol/L)
          x
          體積 (L)
          x
          分子量 (g/mol)
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