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      Firefly-Glo螢光素酶報告基因檢測試劑盒
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      產品簡介:

      Firefly-Glo螢光素酶報告基因檢測系統是一種輝光型定量檢測試劑盒,具有高靈敏度和發光信號穩定的特點,可以滿足高通量檢測螢光素酶在哺乳動物細胞中的表達。相對于美侖閃光型Firefly Luciferase Reporter Assay Kit(MA0517),本品Firefly-Glo Luciferase Reporter Assay Kit(MA0519)具有以下優點:采用了一種全新的螢光素酶檢測底物,提高了發光信號的穩定性,近乎2小時的信號半衰期為實驗設計提供了更大的靈活性;采用加樣-混勻-檢測的操作方法,無需依賴自動進樣器,并且無需棄培養液、離心等步驟,簡化了實驗流程;本試劑盒組分做了大量優化,與傳統閃光型產品相比,無明顯刺激性氣味。Firefly-Glo螢光素酶報告基因檢測試劑盒可用于多種常用細胞培養液:RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等,其半衰期均為2小時左右(22℃),滿足絕大多數高通量實驗需求。


      使用說明:

      1.自備材料

       PBS;多道排槍;白色不透光細胞培養板;化學發光儀或酶標儀。

      2.檢測前準備

      1)首次使用時將Firefly-Glo Luciferase Reaction Buffer一次性全部倒入Firefly-Glo Luciferase Substrate瓶中,充分混勻后,按使用需求進行分裝,建議-70℃長期保存或者短期存放于-20℃不超過一個月,并盡快使用。

      2)每次實驗前將分裝后凍存的檢測試劑平衡至室溫。

      3.操作方法

      1)從細胞培養箱中取出細胞培養板,放置5-15min,恢復至室溫。

      注:使用白色不透光的細胞培養板,減少孔間的信號干擾。

      2)加入檢測溶液

      使用多道排槍向每個細胞孔中加入平衡至室溫的含有底物的Firefly-Glo Luciferase Reaction Buffer,加樣體積與細胞培養液體積相同。例如,96孔板通常加入80-100ul培養液,相應加入80ul-100ul檢測溶液;384孔板通常加入20-30ul培養液,相應加入20-30ul檢測溶液。

      3)振蕩混勻

      為了使得細胞裂解充分,建議將細胞培養板放在振蕩混勻儀或附帶振板功能的儀器上,室溫條件下,采用中高速振板5-10min。

      注:建議振板混勻時間為5-10min,可根據細胞量進行適當調整,確保細胞充分裂解,得到穩定的發光檢測結果。

      4)檢測

      振板混勻后于化學發光儀或酶標儀中檢測Firefly Luciferase報告基因活性。

      注:為得到最佳檢測結果,請在加入檢測試劑后2小時內完成檢測。


       



      注意事項:

      1、檢測儀器選擇:能夠檢測化學發光的儀器都適用本試劑盒的檢測,但是針對相同的樣品,不同檢測器本底信號值和測量值均可能不同;且對于同一樣本檢測,不同儀器的數值不可橫向比較。為防止孔間干擾,推薦使用不透明白色細胞培養板。

      2、由于發光信號會受到檢測環境如培養基組分、溫度等影響,所以應確保同組內不同樣本檢測條件一致。

      3、酶促反應對溫度較為敏感,加樣檢測前務必將檢測試劑以及細胞培養板平衡至室溫。

      4、為保證螢光素酶檢測試劑穩定性,適量分裝后建議-70℃長期避光保存或者短期存放于-20℃不超過一個月,并盡快使用,盡量避免多次反復凍融。

      5、如需同時檢測多個細胞培養板,請盡量確保每個細胞板加入檢測溶液后孵育時間一致,再進行數據讀取,以此獲得最佳的檢測結果。


      保存條件:

      全新試劑盒-20℃保存,一年有效;

      溶解分裝后的Firefly-Glo Luciferase Substrate于-70℃避光保存一年,或-20℃短期保存不超過一個月。

      運輸條件: -10℃干冰運輸

      數據展示


       


      圖1. Firefly-Glo發光體系在光強、穩定性以及線性效果對比P進口品牌。(A) 螢光素酶濃度-光強-時間標曲三維圖。在一定濃度范圍內,標準曲線統計顯示為一個截面,說明meilunbio的Firefly-Glo發光體系在2h以內任一時刻的線性良好。(B) meilunbio的Firefly-Glo螢光素酶報告基因檢測試劑盒對比P 進口公司最新版本,在絕對光強和穩定性方面非常接近。(C) 單一時刻光強-Firefly螢光素酶濃度標曲線性良好(R2=0.9994)。



      圖2. Firefly-Glo發光體系在不同培養基發光及半衰期驗證。美侖Firefly-Glo發光體系在常用培養基如:DMEM、RPMI1640、DMEM/F12、MEMα、F12等都可以正常發光;螢光半衰期在100-120min 左右,與P進口品牌官方公布的數據相當(此處未完全展示,可參考P公司官方網頁)。


       


      圖3. 酚紅濃度-Firefly Glo 螢光穩定性驗證。配制含有濃度梯度的PBS溶液,各自加入等量的螢火蟲螢光素酶并驗證Firefly-Glo 的發光穩定性。由圖可知,meilunbio? Firefly-Glo 對比P進口品牌具有更好的酚紅耐受能力。



      圖4. (A)細胞濃度梯度光強穩定性和(B)細胞濃度-光強標曲示例。在細胞培養基環境中,原位追蹤檢測Firefly Luciferase發光情況。由圖可知,螢光穩定性和絕對光強與P進口品牌差異不大;而且,單一時刻光強-細胞數標曲線性良好(R2=0.9993)。



      圖5. 293T細胞中TNFα 濃度梯度誘導NF-κB通路檢測效果美侖對比P進口品牌。(A) 歸一化處理后,由圖可知TNFα濃度梯度在2h以內各個時刻均保持著相對一致的誘導關系;并且隨著時間進行,這種誘導關系并無明顯變化。(B) 單一時刻TNFα 濃度梯度誘導NF-κB通路效果美侖對比P進口品牌,結果無顯著性差異。


      我司所售出產品僅供于科研研究用途(非臨床科研研究),每次銷售產品行為都適用于我司網上所列明的通用銷售條款。

      英文名字:Firefly-Glo Luciferase Reporter Assay Kit
      質量標準:Meilunbio
      請輸入貨號:
      請輸入批號:
      摩爾濃度計算器 (本計算器可幫助您計算出特定溶液中溶質的質量、溶液濃度和體積之間的關系)
      摩爾濃度計算公式:質量 (g) = 濃度 (mol/L) x 體積 (L) x 分子量 (g/mol)
      質量(g
      =
      濃度 (mol/L)
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      體積 (L)
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      分子量 (g/mol)
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